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生殖道微生态专题

阴道炎功能学检测的临床应用价值评估

分类:
阴道微生态相关
发布时间:
2016/05/09 16:42
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阴道炎功能学检测的临床应用价值评估

 英,岳莹利,范爱萍,耿 女,王 辰,薛凤霞

(天津医科大学总医院,天津 300052)

 

摘要:目的 探讨功能学检测在评价阴道微生态环境、诊断阴道炎等方面的作用。方法 随机取117例阴道

炎患者、49 例无阴道炎者的阴道分泌物,分别通过功能学检测、盐水湿片镜检和革兰染色涂片镜检检测,将三种检测结果进行对比分析。结果 功能学检测与盐水湿片镜检相比,在判断乳杆菌缺乏、诊断外阴阴道假丝酵母菌病(VVC)单一感染、细菌性阴道病(BV)单一感染阳性率上,差异均无统计学意义(P均>005),但吻合度较差或一般。在判断 WBC 数目和诊断滴虫阴道炎(TV)VVC 合并感染、BV 合并感染阳性率上,差异均有统计学意义(P均<005)。过氧化氢(H 2 O 2 )活性与镜检乳杆菌数目呈正相关(r =0314P =0000),白细胞酯酶(LE)活性与盐水湿片镜检WBC数目、中毒性WBC比例均呈正相关(r值分别为06250408P均<005)H 2 O 2LEpH 三项联合检测和镜检诊断需氧菌性阴道炎(AV)阳性率差异无统计学意义(P 均 >005),但吻合度一般。结论 功能学检测对判断乳杆菌减少、诊断BVVVC单一感染有一定作用,对 AV 有辅助诊断作用,可作为镜检辅助诊断方法。但判断 WBC 增多和诊断 TVVVC 合并感染、BV 合并感染阳性率与镜检存在差异、吻合度差或一般。

关键词:阴道炎;功能学检测;盐水湿片;革兰染色涂片

doi:10. 3969/j. issn. 1002-266X. 2014. 41. 027

中图分类号:711. 31 文献标志码:B    文章编号:1002-266X(2014)41-0070-03

阴道炎症是影响女性健康的常见疾病,主要由显微镜从形态学角度诊断,存在经验要求高、主观性强等缺点,在显微镜质量及涂片的均匀度等方面受限。近年来国内外一些研究人员应用酶学,从功能学角度分析阴道微生态状况、诊断阴道炎。目前,相关检测试剂盒主要有细菌性阴道病三联检试剂盒及美国 Femlab 阴道炎六联检试剂盒,但存在不能检测外阴阴道假丝酵母菌病(VVC)和滴虫阴道炎(TV),漏检细菌性阴道病(BV)等缺点。阴道炎功能学检测的临床应用尚处于探索阶段,相关报道较少,缺乏盐水湿片镜检、革兰染色涂片镜检和阴道炎功能性检测三种检测方法的对比分析,缺少单一感染和混合感染的对比分析,而且过氧化氢(H 2 O 2 )和白细胞酯酶(LE)活性及 pH 值在需氧菌性阴道炎(AV)中的辅助诊断作用尚无明确报道。本文进行了相关探讨。

资料与方法

<!--[if !supportLists]-->1.1 <!--[endif]-->临床资料 随机抽取 2010 年 10 月 ~2011 月在天津医科大学总医院就诊的阴道炎患者 117(试验组),选取该院同期健康查体无阴道炎者 49例作为对照组,均为有性生活的女性,试验组、对照组年龄分别为(3078 ± 6882)(3337 ± 7905)岁,两组年龄无统计学差异。除外月经来潮者、妊娠、绝经、1周内有阴道炎用药史、3 d内应用阴道润滑剂、有性交以及不能回答问题的精神病患者。

<!--[if !supportLists]-->1.2 <!--[endif]-->方法

121  阴道炎检查及实验步骤 用无菌窥器暴露阴道,用3个无菌棉拭子轻轻沾取阴道侧壁上 1/3的阴道分泌物,第个棉拭子用于pH 值测定、制备革兰染色涂片 (粤珠食药监械,准字号 2009 1400013 革兰染色液)及盐水湿片。第2个棉拭子用于阴道炎功能学测定。第3个棉拭子用于胺试验。

122  镜检诊断标准 诊断乳杆菌缺乏,盐水湿片按照Donders1评价标准,Ⅰ和Ⅱ为乳杆菌正常,Ⅱ和Ⅲ为乳杆菌减少。革兰染色涂片采用Nugent2研究的评分标准,油镜下乳杆菌>30 /HPF 为正常,乳杆菌≤30/HPF为乳杆菌减少。诊断 WBC 数目异常,盐水湿片主要依据上述的Donders的评价标准,WBC10/HPF时为 WBC增多,WBC10/HPF 时为WBC数目正常。镜检见菌丝或芽孢且有明显的阴道炎症状系真菌感染。BV诊断依据革兰染色Nugent评分法。阴道分泌物盐水湿片镜下见活动的滴虫即可确诊 TV。采用Donders等提出的标准诊断AV。当两种或两种以上阴道炎病原体同时存在,导致阴道局部环境异常和阴道炎症状体征,即为阴道炎混合感染3

12功能学检测标准 应用显色法检测阴道分泌物 H 2 O 2 活性、LE 活性、唾液酸苷酶(NA)、脯氨酸氨基肽酶(PIP)N-乙酰-β-D 氨基葡萄糖苷酶(NAG)pH 共 个生化标志物。H 2 O 2 阳性指示阴道乳杆菌减少或缺失,阴性提示有大量乳杆菌存在;LE 阳性提示 WBC 15 /HPF;NA 阳性提示有 BV存在;H 2 O 2 ( + )LE( + )且 pH4. 提示 AV 阳性;PIP 检测结果结合 NAG 结果、pH 后综合判断BVVVC 或 TV 感染,如图 所示。

阴道炎功能学检测的临床应用价值评估

124  统计学方法 采用 SPSS11统计软件,率的比较采用χ检验,相关性采用 Spearman 相关分析。P005为有统计学差异;Kappa07,表示吻合度较强;0> Kappa0. 表示吻合度一般;Kappa 04,表示吻合度较弱。

2  结果

2评估乳杆菌缺乏 功能学检测、革兰染色涂片、盐水湿片镜检评估乳杆菌缺乏的阳性率分别为4578%(76/166)4277% (71/166)4819% (80/166),三者比较,检测乳杆菌缺乏的阳性率差异均无统计学意义,但吻合度均弱(χ2 = 0254P=0615Kappa = 0232;χ2 = 0167P = 0683Kappa= 0347)Spearman 相关性分析结果显示,H 2 O 2浓度与盐水湿片镜检乳杆菌(LBG)分级负相关(r =0497P = 0. 000),与革兰染色镜检乳杆菌数目正相关(r =0314P =0000)

2评估 WBC 数目 功能学检测诊断 WBC增多的阳性率为 506% (84/166),盐水湿片镜检诊断WBC 增多阳性率为349% (58/166),差异有统计学意义(χ2 =16095P = 0. 000),且两者的吻合度一般(Kappa = 0496)Spearman 相关性分析结果显示,LE 活性与盐水湿片镜检的 WBC 数目、中毒性WBC比例均呈正相关(r值分别为06250408P均 <005)

2诊断 BV 功能学检测和革兰染色镜检诊断BV单一感染阳性率均为1386% (23/166),阳性率差异无统计学意义(χ2 =0083P =1. 000),两者的吻合度一般(Kappa =0. 697);二者诊断BV合并感染阳性率分别为 482% (8/166)1265% (21/166),阳性率差异有统计学意义(χ2 = 11077P =0000),两者的吻合度一般(Kappa =0518)

2诊断 VVC 功能学检测和革兰染色镜检诊断VVC 单一感染阳性率分别为 1747% (29/166)1807%(30/166),阳性率差异无统计学意义(χ2 =0000P = 1000),两者的吻合度一般(Kappa =0650);二者诊断VVC合并感染阳性率分别为181%(3/166)1445% (24/166),阳性率差异有统计学意义(χ2 = 19048P = 0000),两者的吻合度较弱(Kappa =0196)

25  诊断 TV 功能学检测和显微镜镜检诊断 TV的阳性率分别为 14. 46% (24/166)3. 61% (6/166),差异有统计学意义(χ2 =16056P =0000),两者的吻合度较弱(Kappa =0363)

2诊断 AV H 2 O 2 LEpH 三项联合检测和镜检诊断AV阳性率分别为 2410% (40/166)3133%(52/166),比较差异无统计学意义(χ2 =3184P =0073),两者的吻合度一般(Kappa =0432)

讨论

31  评估乳杆菌缺乏 女性下生殖道是人体内重要微生物区,其中正常存在的乳杆菌可分解上皮细胞中的糖原产生酸性物质维持阴道酸性环境,分泌多种抗菌物质如 H 2 O 2 、乳酸菌素;同时刺激免疫系统抑制和杀灭病原菌,黏附于上皮细胞阻止病原微生物入侵;对于维持阴道微生态平衡具有重要作用45。由于90%乳杆菌可产生H2 O 2,故可通过测定 H 2 O 2 活性作为评价乳杆菌数目和功能的指标。本研究利用检测 H 2 O 2 活性,从功能学角度分析阴道内乳杆菌是否缺乏,将检测结果分别与革兰染色涂片、盐水湿片镜检相比,阳性率差异均无统计学意义,但吻合度均弱。H 2 O 2 浓度与盐水湿片镜检LBG分级呈负相关,与革兰染色镜检乳杆菌数目呈正相关。H 2 O 2浓度能够间接提示乳杆菌含量,即H2 O 2浓度越高,乳杆菌的数目越多,且LBG分级越低。二者一致性均较差,可能是由于存在不产H 2 O 2的乳杆菌,以及受到取样少、血性污染、混合感染等因素影响。

32  评估WBC数目增多  当炎症发生时,多形核WBC内趋化聚集大量 LE,而 WBC 吞噬的细菌释放水解酶、细菌毒素破坏细胞膜,使 LE 释放到胞外,导致LE活性增加。Per-Anders 6证实了在非妊娠女性的阴道分泌物中,LE 活性和 WBC 数目的相关性。2002 年 Donders 等在提出 AV 诊断时将中毒性 WBC 的比例作为判断阴道炎严重程度的指标。本研究也显示,LE 活性与镜检的 WBC 数目、中毒性WBC 比例均呈正相关。说明通过检测LE 活性能间接提示 WBC 数目及中毒性 WBC 比例,反映炎症有1 7山东医药2014年第54卷第41期无及其严重程度。然而本研究发现与镜检相比,LE活性在评估 WBC 数目增多时差异有统计学意义,吻合度一般。可能是由于镜检WBC 数目受WBC完整性的影响,且单核WBC不产生LE,同时LE活性可能还受到标本储存条件的影响。

33  诊断 BV 及合并感染 NA 主要来源于BV 感染相关的普雷沃菌属和类杆菌属,目前利用唾液酸酶法快速诊断BV,如BVBlue和速蓝试剂已得到国内外学者的认可7,广泛应用于临床。PIP 可由多种细菌和真菌产生,包括BV 相关病原菌加德纳菌和动弯杆菌属,当存在 BV 感染时,该酶的浓度有显著增加。现已有大量研究将该酶用于 BV 诊断8。由于 NA 和 PIP 在诊断 BV 的灵敏度上都存在缺陷,因此阴道炎功能学检测综合利用这两种酶,以提高诊断的准确性。本研究发现,功能学检测和革兰染色镜检法在诊断 BV 单一感染时阳性率差异无统计学意义,可以相互替代。但是对于 BV 合并感染的诊断,二者阳性率差异有统计学意义,功能学检测阳性率低、吻合度差,可能是因为合并感染时其他病原体也能产生多种酶类导致结果受影响。

3. 诊断 VVC 及合并感染 PIP 除了可由 BV 相关病原体产生外,还可由白假丝酵母菌、光滑假丝酵母菌产生,因此部分真菌感染的标本该酶呈阳性结果。然而白假丝酵母菌、热带假丝酵母菌还可产生NAG9,故功能学检测利用该酶结合 pH 值诊断VVC。与镜检结果相比较,发现 VVC 单一感染时,二者阳性率差异无统计学意义,达到中度一致,可以相互替代。但对 VVC 合并感染二者阳性率差异有统计学意义,功能学检测阳性率低、吻合度差,可能是由于光滑假丝酵母和克柔假丝酵母菌无法产生NAG,且当存在混合感染时,pH 值将会升高,导致利用该酶诊断 VVC 的灵敏度降低。

3. 诊断 TV 除假丝酵母菌感染外,滴虫感染也可释放NAG10]。当 NAG阳性时,依靠VVCTVpH 值上的不同基本上可以将二者区分开。本研究结果显示,在诊断 TV 时功能学检测和显微镜镜检相比阳性率差异有统计学意义,前者阳性率高、吻合度较弱。可能与研究样本量小、确诊滴虫感染缺乏培养作为金标准而镜检阳性率低、合并感染时(VVCBVAV合并感染)pH升高导致功能学检测出现假阳性结果等有关,但其仍可作为TV的筛查手段。

3. 诊断AV目前诊断AV主要依靠盐水湿片,对检验人员和检验设备要求较高,难以广泛应用于临床,基于AV阴道分泌物pH升高、产H 2 O 2的乳杆菌减少和含中毒性颗粒的WBC增多的特点,本研究利用联合测定H 2 O 2浓度、LE活性、pH值诊断AV,和盐水湿片镜检对比其阳性率差异无统计学意义,两者的吻合度一般。关于二者吻合度不高,除了与乳杆菌产H 2 O 2能力、LE仅由多形核WBC释放等因素有关外,还可能与阴道微生态失调伴随的乳杆菌、WBC异常,BV合并WBC增多的疾病等易造

成的假阳性有关。本研究首次采用三项联合检测诊断AV,对开拓AV的诊断方法做了一些有益探索。三项联合检测因操作简便、快速、结果客观具有一定的优势,然而其与湿片镜检相比吻合度不高,仅可用于辅助诊断AV,进一步的研究旨在寻找AV的特异性酶,以便快速、客观、准确地诊断AV

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(收稿日期:2014-05-22)