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生殖道微生态专题

加德纳菌

分类:
细菌性阴道病
发布时间:
2015/03/13 17:10
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加德纳菌性阴道炎又名嗜血杆菌性阴道炎,以前曾归于棒杆菌性阴道炎,是由加德纳杆菌引起的一种阴道粘膜炎症,可通过性交传染。故列为性传播疾病。 大量研究表明:在性关系混乱的人群中,加德纳菌性阴道炎有高流行率。与患者发生性关系的男性伴侣中,90%的尿道中可发现此菌。加德纳杆菌为革兰氏阴性细小杆菌,常呈球杆状,有时呈丝状和多形状,常见两极染色。宽0.4--0.6微米,长1--2微米大小,无活动力、无鞭毛、无芽孢。许多菌株有荚膜。在人工培养时必须给予新鲜血液才能生长繁殖,故有“嗜血”之称。但其生物特性与嗜血杆菌不尽相同,临床上引起的阴道炎为非特异性阴道炎。 加德纳杆菌引起的感染多数较轻,多见于性活跃妇女。急性期白带增多,有鱼腥或氨的臭味,外阴潮湿不适,常伴有阴道灼热感、性交痛及外阴骚痒。检查见部分患者外阴红肿,阴道粘膜充血,呈灰红色,轻度红肿,分泌物多呈均质性,稀薄,灰白色,有时为乳黄色或类绿色,腥臭味。阴道pH常为5--5.5。有时白带量少,仅有薄薄一层,如膜样覆盖在充血的阴道壁上。少数患者阴道壁有红斑或淤点,孕妇患者可引起流产或产后子宫内膜炎。感染重者也可导致败血症、尿道感染、肾周脓肿和膀胱炎等。 根据临床表现,阴道分泌物涂片或培养确诊。尤其能查到特征性线索细胞,诊断不难。 鉴别诊断应包括所有的淋菌性、真菌性、滴虫性阴道炎。 检验方法: 1、临床标本:宫颈分泌物,取自医院门诊妇产科就诊的非特异性阴道炎(NSV)患者,常规消毒用无菌棉签自宫颈口取分泌物于无菌生理盐水管中。 2、革兰染色法:取无菌生理盐水中的宫颈或阴道分泌物直接涂片,常规革兰染色,找到线索细胞者为阳性。 3、吖啶橙染色荧光法:取无菌生理盐水中的宫颈或阴道分泌物直接涂片,自然干燥,火焰固定,0.1 mmol/L吖啶橙染色37℃30 min,用0.01 mol/L PBS冲洗2次,0.01 mmol/L 氯化钙分色1 min,用0.01 mol/L PBS缓冲液冲洗1次,甘油封片,荧光显微镜观察结果。在上皮细胞中发现成堆桔黄色细小杆菌为阳性。 4、分离培养鉴定法:将无菌生理盐水中的阴道或宫颈分泌物,以无菌手续接种于阴道加德纳菌专用分离培养基上,置5%二氧化碳培养箱37℃孵育48 h,挑取灰色、半透明、光滑、露滴状样菌落,如为革兰染色阴性小杆菌者,进行生化鉴定,生化鉴定标准按文献进行鉴定。 5、PCR检测法:(1)根据Belkum等报道加德纳菌位于IIS-23srRNA基因区为特异性引物序列,扩增片段:433bp。引物15′-TTTCGTGGAGGGTTCGATTCTGG-3′引物2 5′-TACA-AGCTGATAGGACGCG-3′由上海生物工程公司合成。(2)临床标本模板DNA的制备:将宫颈分泌物500μl生理盐水中,12 000 r/min离心10 min,弃上清液,加碱性裂解液,98℃10 min,12 000 r/min离心5 min,取上清液做模板。(3)PCR扩增和产物检测:反应总体积为25μl,包括10×PCR缓冲液2.5 μl,4×dNTP 1.5 μl,引物1,2各0.25 μl,无菌去离子水9.5μl,模板10 μl,Taq DNA聚合酶1 U/μl,以无菌石蜡油30 μl覆盖,进入PCR循环,循环参数为:95℃5 min,94℃ 1 min,58℃ 1 min,72℃ 1 min,32个循环,最后72℃延伸5 min。取扩增产物15 μl,于2%琼脂糖(含EB液)上100 V电泳30 min,于紫外光下观察结果,出现433 bp扩增带者为阳性,未见433 bp扩增带为阴性。

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